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【產(chǎn)品名稱】

通用名稱：犬瘟熱病毒（CDV）核酸檢測試劑盒（熒光PCR法）

Name：Canine Distemper Virus Detection Kit (Real-Time PCR Method)

【包裝規(guī)格】10T/盒         

【預期用途】

犬瘟熱是由犬瘟熱病毒(Canine Distemper Virus, CDV)引起的一種急性、高度接觸性傳染病。該病廣泛分布于世界各地，是當前危害犬群最嚴重的疫病之一，對其它犬科動物、鼬科動物和貓科動物也具有較大危害。CDV感染臨床癥狀，根據(jù)病毒種屬、環(huán)境因素以及個體對感染的反應不同而輕重不同。臨床癥狀主要局限于上呼吸道，所以咳嗽、流鼻涕會很明顯。未經(jīng)免疫的幼犬很可能出現(xiàn)嚴重癥狀，如肺炎、腹瀉、脫水、厭食等^[1]。犬瘟熱的傳染性極強，且發(fā)病率高，常?？梢鸫笈康娜?、貂、狐及部分野生動物發(fā)病，致死率可達30%-80％，給毛皮動物產(chǎn)業(yè)和野生動物保護業(yè)造成了重大經(jīng)濟損失。目前，本病缺乏特效的治療方法，早期診斷及早使用抗血清是治療該病的重要措施。

本試劑盒適用于檢測的犬肝、脾、肺等組織、血液、血清、淚液、鼻液、唾液、糞便。等標本中犬瘟熱病毒RNA，適用于犬瘟熱病毒感染的輔助診斷。其檢測結(jié)果僅供參考。

【檢驗原理】

本試劑盒采用TaqMan探針法實時熒光PCR技術(shù)，設計一對犬瘟熱病毒特異性引物，結(jié)合一條特異性探針，用熒光PCR技術(shù)對犬瘟熱病毒的RNA進行體外擴增檢測，用于臨床上對可疑感染者的病原學診斷。

【試劑組成】

說明：不同批號的試劑盒組分不可交互使用。

【儲存條件及有效期】-20℃±5℃，避光保存、運輸、反復凍融次數(shù)不超過5次，有效期12個月。

【適用儀器】ABI 、安捷倫MX3000P/3005P、LightCycler、Bio-Rad、Eppendorf等系列熒光定量PCR檢測儀。

【標本采集】病死犬可采集肝、脾、肺、等組織；活犬可采集血液、血清、淚液、鼻液、唾液、糞便。

【保存和運輸】

上述標本短期內(nèi)可保存于-20℃，長期保存可置-70℃，但不能超過6個月，標本運送應采用2~8℃冰袋運輸，嚴禁反復凍融。

【使用方法】

1. 樣品處理（樣本處理區(qū)）

1.1 樣本前處理

組織樣品：每份組織分別從3個不同的位置稱取樣品約1g，手術(shù)剪剪碎混勻后取0.5g于研磨器中研磨，加入1.5mL生理鹽水后繼續(xù)研磨，待勻漿后轉(zhuǎn)至1.5mL滅菌離心管中，8000rpm離心2min，取上清液100μL于1.5mL滅菌離心管中；咽拭子樣品直接取100μL于1.5mL滅菌離心管中。

1.2 核酸提取

推薦采用廣州維伯鑫生物科技股份有限公司生產(chǎn)的核酸提取或純化試劑（磁珠法或離心柱法）進行核酸提取，請按照試劑說明書進行操作。

2. 試劑配制（試劑準備區(qū)）

根據(jù)待檢測樣本總數(shù)，設所需要的PCR反應管管數(shù)為N(N=樣本數(shù)+1管陰性對照+1管陽性對照；樣品每滿10份，多配制1份)，每測試反應體系配制如下表：

將混合好的測試反應液分裝到PCR反應管中，21uL/管。

3. 加樣（樣本處理區(qū)）

將步驟1提取的核酸、陽性質(zhì)控品、陰性質(zhì)控品各取4μL，分別加入相應的反應管中，蓋好管蓋，混勻，短暫離心。

4. PCR擴增（核酸擴增區(qū)）

4.1 將待檢測反應管置于熒光定量PCR儀反應槽內(nèi)；

4.2 設置好通道、樣品信息，反應體系設置為25μL；

熒光通道選擇： 檢測通道（Reporter Dye）FAM， 淬滅通道（Quencher Dye）NONE，ABI系列儀器請勿選擇ROX參比熒光，選擇None即可。

4.3 推薦循環(huán)參數(shù)設置：

【注意事項】

1.所有操作嚴格按照說明書進行；

2.試劑盒內(nèi)各種組分使用前應自然融化，完全混勻并短暫離心；

3.反應液應避光保存；

4.反應中盡量避免氣泡存在，管蓋需蓋緊；

5.使用一次性吸頭、一次性手套和各區(qū)專用工作服；

6.樣本處理、試劑配制、加樣需在不同區(qū)進行，以免交叉污染；

7.實驗完畢后用10%次氯酸或75%酒精或紫外燈處理工作臺和移液器；

8.試劑盒里所有物品應視為污染物對待，并按照《微生物生物醫(yī)學實驗室生物安全通則》進行處理。

【參考文獻】

[1] 劉雯, 夏志平, 靳朝. 犬瘟熱研究進展[J]. 動物醫(yī)學進展, 2010, 31(8): 83-87.

[2] 國家質(zhì)量監(jiān)督檢驗檢疫總局. GB/T 27532-2011 犬瘟熱診斷技術(shù)[S].

【生產(chǎn)企業(yè)】

企業(yè)名稱：廣州維伯鑫生物科技股份有限公司 郵 編：510663

生產(chǎn)地址：廣州高新技術(shù)產(chǎn)業(yè)開發(fā)區(qū)科學城科豐路31號G11棟201號

電子郵箱：info@vipotion.com 電 話：020-66377266

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